1988年,中国艺术节在北京举行,上海人艺参演的剧目是《中国梦》,奚美娟担任女主角,夺得中国戏剧梅花奖。1990年,参演首部电影《假女真情》,获得第十一届中国电影金鸡奖最佳女主角奖。1992年7月,在电影《蒋筑英》中饰演蒋筑英的妻子路长琴。1998年6月,与周迅主演根据毕淑敏同名小说改编的电视剧《红处方》,饰演沈若鱼一角。2000年6月,主演反腐题材电视剧《红色康乃馨》,奚美娟以反面人物形象出现,在剧中饰演大华集团董事长蓝思红。2001年,主演电视剧《再婚家庭》。2004年2月,与贾一平、王茜主演电视剧《坐庄》,凭借《坐庄》获得第五届金鹰艺术节“观众喜爱的电视剧女演员”奖;同年,担任第24届中国电影金鸡奖评委。2008年,在电视剧《春草》中,奚美娟一改以知性形象,扮演一个农村母亲;7月,参演反映汶川地震的纪实性电视连续剧《震撼世界的七日》;在海清、林永健主演的电视剧《王贵与安娜》中饰演安娜的母亲;12月,参演黄海波主演的谍战剧《黑三角》,饰演反派角色“于黄氏”。2010年9月,在张艺谋电影《山楂树之恋》中饰演静秋的母亲;2011年4月,参演贾一平主演的年代商战剧《大浴堂》2012年,与宋春丽、陈瑾主演反映国共内战电视剧《大地情深》。2013年11月,参演赵宝刚执导的都市情感话题剧《老有所依》在浙江、东方、北京、天津四大卫视播出,奚美娟饰演慈母谢亚芝。2016年,参演的电影《杠上开花》上映。2020年2月21日,参演的都市剧《安家》播出;5月28日,其出演的刑侦剧《燃烧》开播,在剧中饰演龙星集团的董事会主席赵月娥;9月,入围第七届中国电视好演员奖红组女演员名单。10月20日,由中国视协演员工作委员会主办的第七届“中国电视好演员”网络投票结果公布,奚美娟获得中国电视好演员优秀演员(红组男演员);11月10日,由赵薇发起的国内首部女性独白剧《听见她说》官宣阵容,白百何、郝蕾、齐溪、王智、奚美娟、杨紫、咏梅、杨幂分别加入8集单元剧演出。2021年6月11日,出演由侯咏执导的电影《望道》发布“火浪版”海报并正式宣布主创阵容。